ARMS-PCR技术_armspcr技术

1.arms pcr原理

ARMS-PCR扩增阻滞突变系统PCR （Amplification Refractory Mutation System PCR，ARMS-PCR），又称为等位基因特异性PCR（Allele-Specific PCR，AS-PCR）是Newton等首先建立用来检测已知突变的方法。

2.arms-pcr检测技术

ARMS基本原理如果引物的3′端碱基与模板碱基不互补，则用一般耐热DNA聚合酶无法延伸因此根据已知点突变设计2条引物，其3′端碱基分别与突变和正常的模板碱基互补，从而将有某种点突变的模板与正常模板区分开来。

3.arms-pcr法

此法已用于多种疾病的点突变的检测我们都清楚ARMS的简单原理，即理论上Taq DNA聚合酶必须在引物3’末端碱基与模板完全互补情况下才能进行有效的聚合反应，但由于Taq DNA严谨性受多因素影响，某些情况下，即使引物的3’末端碱基与模板不互补，延伸仍然可以进行（如果3′末端只有一个碱基的错配，那么是引物是可以错配结合的并可以进行延伸的，只是延伸的效率低于那些3′末端正好配对的引物），而且不同的3’末端错位（mismatch）有不同的延伸效率（如果在3′末端引入了其他的错配碱基，那么错配的数目太多或达到一定程度，那么3′末端无法进行延伸），因而仅靠引物3’末端一个碱基的错配不能充分而可靠地区分两个等位基因，进而造成假阳性结果。

4.arms-pcr检测的质控

如何提高引物延伸的特异性呢？通过人为地使引物3′末端的第二个碱基发生错配来提高引物延伸的特异性防止发生错配，TaqDNA聚合酶缺少3′→5´外切酶活性,因此对于3′末端错配的引物,以低于正常末端配对引物的速度延伸,当错配碱基的数目达到一定程度或者条件达到一定的严谨程度时, 3′末端碱基则因磷酸二酯键形成困难而不能延伸,反应终止,也就得不到特异长度的扩增条带,从而表明模板DNA没有与引物3′末端相应的突变;如果PCR结果能得到特异长度的扩增条带,表明模板DNA上具有与引物3′末端相应的突变。

5.arm cpsr spsr

但引物3′末端的第二个碱基具体突变成哪个碱基这个选择可是大有学问的：为了提高反应的特异性，在倒数第二个碱基处引入了一个故意的错配举一个例子让大家更好的了解这个故意的错配应该选择哪个碱基根据下图，我们首先考虑野生型引物与WP-MT的情况，其中WT和MT的1号位T/G表现出弱不稳定错配（黄色）。

6.arms基于什么技术

然后我们看倒数第二个位置来观察模板序列上的碱基，在这种情况下是G根据图中所示，在两个AS引物中，只有核苷酸A应该放在3号位末端碱基旁边，以确保更强的不稳定

7.arm risc

优 点1. 操作简单；时间快速；灵敏度高，可检测低至1%的突变2. 只有一次开盖过程，有效防止污染3. 整个操作只需Real-time PCR仪4. 成本较低缺 点1. 通量较低，无法在单次运行中检测到数千个 SNP‎‎最后

8.arms原理

2. 不能检测未知突变，而 ARMS-PCR 的局限性包括未检测到缺失/其他主要重复和染色体异常3. 不适于位点附近GC含量过高或过低的SNP的分型检测如果 PCR 中没有内部控制，或者 PCR 循环期间温度波动，则存在假阴性结果。

9.pcr arms法

此方法适宜于对通量要求不高的实验室进行突变检测，特别是体细胞突变

10.arm risc v

作者：海星生物公众号：Cas9X细胞基因敲除以上内容由海星生物（http://www.cas9x.com)提供服务内容：CRISPR/Cas9细胞基因编辑　载体/病毒包装 PDO/动物模型CDX　稳转细胞株 干细胞/原代细胞 培养试剂盒 分子诊断NGS标准品